ارزیابی اثر پروتئین لاکتوفرین خالص شده از آغوز (کلستروم) شیر گاو روی رده سلولی kyse-30 سرطان مری

لاکتوفرین یک گلیکوپروتئین با وزن مولکولی80 کیلو دالتون، عضوی از خانواده ترنسفرین است که از ده مکانیسم شناخته شده عملکرد ممانعت شیمیایی ترکیبات ضد سرطان، لاکتوفرین به تنهایی 6 مورد از این عملکردها را دارد و سرطان را مهار می کند. در مطالعه حاضر اثر پروتئین لاکتوفرین خالص شده از کلستروم شیر گاو به عنوان یک عامل ضد سرطان روی رده ی سلول سرطان مری ارزیابی شد. برای این منظور کلستروم شیر گاو بلافاصله بعد از زایش جمع آوری گردید. ابتدا چربی و سپس کازئین آن جدا شد. سپس برخی از پروتئین های شیر با رسوب دهی از طریق آمونیوم سولفات جدا شدند. در مرحله بعد لاکتوفرین با استفاده از ستون کروماتوگرافی تبادل کاتیونی cm-sephadex-c50 با دستگاه fplc خالص سازی شد. برای شناسایی پروتیئن بدست آمده از روش الکتروفورز sds-page استفاده شد. پروتئین لاکتوفرین خالص با وزن مولکولیkda 80 با غلظت mg/ml2 از کلستروم بدست آمد. درصد خالص سازی برای لاکتوفرین بدست امده 90? بود. سلول های سرطان مری kyse-30 و سلول نرمال hek در انکوباتور co2 کشت داده شدند پس از رشد مناسب سلول ها، لاکتوفرین خالص شده با غلظت های متفاوت به رده های سلولی به مدت 20 ساعت اضافه گردید و اثر مهار رشد سلول سرطانی و مرگ سلولی با استفاده از روش های mtt و flow cytometry بررسی شدند. اثر بالاترین غلظت مهاری در زمان های متفاوت نیز با روش mtt ارزیابی شد. در آزمون mtt مشخص شد که در غلظت µg/ml500 لاکتوفرین، میزان زنده مانی لاین سلول سرطانی مری kyse را در زمان 20 و 60 ساعت به ترتیب به میزان 53? و 80? کاهش داده اما اثری روی سلول نرمال ندارد. همچنین با بررسی روش فلوسایتومتری مشخص شد که لاکتوفرین منجر به القای مرگ سلولی به صورت آپوپتوز در لاین سلولی kyse می شود.